本发明公开了一种酶生物燃料电池电极及在制备双室酶生物燃料电池中的应用。本发明是以碳纸为电极基板，以海藻酸钠／碳纳米管／壳聚糖复合体系固定酶得到酶生物燃料电池电极。当酶为葡萄糖氧化酶，得到的是阳极；当酶为辣根过氧化物酶，得到的是阴极；然后以酶反应底物为燃料，质子半透膜为分隔膜组装得到双室酶生物燃料电池。本发明采用包埋法和吸附法协同固定酶，固定效果好，酶的性能稳定，生物相容性好。本发明提供的酶生物燃料电池电极应用广泛，提供的双室酶生物燃料电池性能好。