本发明涉及特异性分子识别材料技术领域，具体为一种既能检测AmpCβ?内酰胺酶，又能筛选AmpCβ?内酰胺酶抑制剂，且可筛查菌株耐药性的多功能荧光探针及其制备方法和应用。本发明由化合物1经三步合成了具有检测AmpCβ?内酰胺酶和筛选AmpCβ?内酰胺酶抑制剂以及可筛查菌株耐药性的多功能荧光探针，合成步骤少、后处理过程简单，易于操作，产物易得。本发明的多功能荧光探针基于头孢母核进行设计改造，灵敏度高，特异性好，且有较好的抑菌效果；能同时用于AmpCβ?内酰胺酶的检测和AmpCβ?内酰胺酶抑制剂的筛选，可以在细菌水平上对细菌耐药性进行检测，并且可以鉴别细菌耐药机制。