本发明公开了一种大豆多肽及其制备方法与应用。其特征是以腐乳为原料、分两步提取制备大豆多肽。首先，将腐乳、腐乳冻干品或脱脂腐乳按1：5?1：10加水后，提取，经离心或过滤，收集滤液，蒸发浓缩，冷冻干燥；再经SephadexG15葡聚糖凝胶层析过滤、分部收集，获得分子量为500?1000Da和分子量500Da以下的水溶性大豆多肽。在此基础上，水提后余下的残渣再用60?90％乙醇进行提取，经离心或过滤、浓缩及干燥，即为分子量3000Da以下的醇溶性大豆多肽。以上述方法提纯制备的大豆多肽，纯度在80％以上，盐含量在0.5％以下，抗氧化活性、抑制乳腺癌细胞MCF?7和肝癌细胞HepG2生长的作用显著。