本发明属于生物医药用高分子聚合物材料技术领域，公开了一种基于胆固醇修饰的ｐＨ响应多肽聚合物及制备方法和应用。该多肽聚合物具有公式（１）所示结构：ｍＰＥＧ?Ｒ?Ｃｈｏｌ（１）。本发明多肽聚合物为聚乙二醇单甲醚亲水修饰、胆固醇疏水修饰的多肽ｐＨ响应两亲性三嵌段聚合物材料，在水溶液中自组装为纳米胶束，有效包载水难溶性药物，可应用于医药领域，特别适用于制备水难溶性抗癌药物的靶向载药系统。且其拓扑结构可调控，合成工艺简单，可通过调节具有ｐＨ响应的多肽含量调控药物的释放速率，满足不同药物的释放要求。本发明的多肽聚合物的临界聚集浓度较低，仅为１．８～４．８ｍｇ／Ｌ，因而其载药胶束的稳定性高。