本发明公开了可控性单分散各向异性凹槽四面体状胶体粒子的制备方法。该方法先制备球形种子胶体粒子，然后以质量份数计，将50～100份所述的球形种子胶体粒子、50～100份的第二单体、2～10份的引发剂、10～50份的稳定剂、100～500份的溶胀试剂、500～1000份甲醇和500～1000份水混合加入密闭容器中，超声分散形成分散液，置于60～70℃水浴中水平振荡引发聚合反应，恒温反应后所得的分散液离心、洗涤，冷冻干燥，得到凹槽四面体状胶体粒子的非球形胶体粒子。发明制备出的凹槽四面体状粒子单分散性好、形貌规则、凹槽深度可控且具有各向异性，疏水性的凹槽能够和疏水性的球形粒子进行特异性识别自组装。